Молекулярно-генетические исследования при невынашивании беременности
Бесплатный вебинар по невынашиванию беременности от МГЦ «Геномед»
В ходе вебинара Руководитель МГЦ «Геномед» к.м.н. Канивец Илья Вячеславович отвечает на следующие вопросы:
- Актуальность проблемы невынашивания беременности
- Важность генетического исследования плодного материала
- Правовые и регламентирующие документы
- Почему происходят спонтанные аборты, могут ли они повториться и что делать далее
- Современные методики диагностики против классического кариотипа
- Подробно о молекулярном кариотипировании «Оптима» и «Оптима расширенный»
- Полное секвенирование генома плодного материала «Фертус»
- Клинические случаи
- Как выбрать (какие показания) правильное исследование
- Преимущества применяемых методик
- Какие образцы подойдут для исследования
- Сколько стоят исследования и сколько времени они выполняются
Тесты первой линии для диагностики причин невынашивания беременности
Почему это произошло? Повторится ли это?
Что делать, чтобы это не произошло вновь?
В недавно проведенном исследовании отмечалось, что 95% пациентов, которые прошли процедуру анализа хромосом для установления причины выкидыша, были довольны тем, что сделали его; а две трети, которые его не сделали, сказали, что сожалеют об этом.
Готовы ли мы дать ответы?
Да!
Результаты дают прогноз для следующей беременности, позволяют избежать других неинформативных методов обследования или неоправданного применения лекарственных препаратов
Недостатки существующих методов
Ограничением традиционного кариотипирования является клеточная культура, которую нужно выращивать в лабораторных условиях в течение 2-4 недель.
Дегенерирующие, умирающие или уже мертвые клетки для проведения традиционного кариотипирования не подходят, так как их рост в лабораторных условиях зачастую невозможен. Именно это влечет за собой 10-40% риска неудачного результата.
Особенно это касается эмбрионального материала, когда клетки плода погибают при заборе, транспортировке и хранении.
Для Молекулярно-генетических исследований при невынашивании не нужны живые клетки. Достаточно небольшого количества ДНК, и ее всегда можно выделить из полученного материала.
Генетическое исследование ворсин хориона это:
- Высокая разрешающая способность ― в 20 раз выше, чем у анализа кариотипа.
- Стандартизованный результат ― нет субъективизма цитогенетика.
- Информационная поддержка ― при интерпретации результатов можно использовать специализированные базы данных.
- Нет необходимости культивирования клеток ― отсутствует вероятность неудачного анализа.
- Нет необходимости в живых клетках ― материал можно хранить и транспортировать.
- Срок выполнения ― 10 дней (анализ кариотипа > 20 дней).
«Оптима»
- ХМА на матрицах средней плотности
- Превосходит стандартный метод кариотипирования плодного материала по скорости, качеству и количеству выявляемой патологии
- Дополнительные или недостающие хромосомы (анеуплоидии).
- Полный дополнительный набор хромосом (триплоидии).
- Дополнительные или отсутствующие части хромосом (дупликации и делеции).
- Две копии хромосомы от одного родителя (однородительская дисомия).
- Контаминацию материнскими клетками.
Выполняется 12 дней
«Оптима расширенный»
- ХМА на матрицах высокой плотности
- За счет матрицы высокой плотности позволяет выявить не только хромосомную, но и моногенную патологию
- муковисцидоз;
- хроническое грануломатозное заболевание, тип 1;
- анемия Фанкони;
- семейная дизавтономия;
- болезнь Ниманна–Пика, тип А.
- синдром Смита–Лемли–Опица;
- несиндромальная нейросенсорная тугоухость;
- болезнь Тея–Сакса;
- синдром Блума;
- болезнь Канаван;
- гликогеноз Ia типа;
- муколипидоз, тип IV;
- ахондроплазия.
Выполняется 12 дней
«Фертус»
- NGS
- Самый полный тест, если вы хотите знать все о своей проблеме
- Моногенную патологию (точечные мутации в экзонах, интронах и межгенных участках).
- Хромосомную патологию (анеуплоидии, триплоидию, делеции и дупликации, однородительские дисомии и участки отсутствия гетерозиготности), в том числе мозаичные варианты.
- Болезни экспансии (например, экспансию тринуклеотидных повторов).
- Патологию митохондриального генома.
Выполняется 90 дней
Пузырный занос (наиболее частый тип гестационной трофобластической болезни) с полной отцовской однородительской дисомией в 20% и частичный диандрический пузырный занос в 5% случаев может принимать злокачественное течение, поэтому важно вовремя установить его происхождение.
Несмотря на результативность молекулярного кариотипирования, 50% причин невынашивания беременности не детектируются, так как не связаны со структурными и количественными изменениями хромосом и в некоторых случаях имеют моногенную природу.
- Ахондроплазия (OMIM # 100800)
- Cиндром Ретта у плодов мужского пола (OMIM # 312750)
- Cиндром Нунан (OMIM # 163950)
- Синдром множественных птеригиумов, летальный тип (OMIM # 253290)
- Смита-Лемли-Опица синдром (SLOS) (OMIM # 270400)
- Пероксисомные болезни (PEX genes)
- Синдром удлинения QT (OMIM #192500)
Показания к проведению исследования:
- Неразвивающаяся беременность любого срока
- Привычное невынашивание
- Самопроизвольный аборт
- Преждевременные роды
- Мертворождение
- Прерывание беременности по медицинским показаниям
Генетические исследования при невынашивании ― это одновременная детекция более 500 хромосомных аномалий !
Все делеции и дупликации анализируются врачом-генетиком с использованием реферируемых и постоянно пополняемых баз данных.
Для исследования необходимо 20-30 г материала эмбрионального происхождения, который необходимо поместить в специальный набор или в контейнер с 0,9% физиологическим раствором.
Для сбора материала рекомендуется использовать специальные наборы, которые содержат контейнер с консервирующим раствором, специальную упаковку и инструкцию.
- На сроке до 12-й недели беременности - в контейнер помещается весь плодный материал.
- На сроке после 13-й недели беременности - в контейнер помещается только кусочек паренхиматозных органов плода либо пуповины.
- После взятия материал необходимо хранить в холодильнике при температуре от +4 до +8C°. НЕ замораживать!
- Доставка в лабораторию должна быть обеспечена в течение 48 часов после забора образца.
Если обнаружена анеуплоидия
Анеуплоидии (моносомии или трисомии одной или нескольких хромосом) встречаются наиболее часто.
Как правило, это случайные события и риск их повторения при следующих беременностях является общепопуляционным. Прогноз благоприятный.
Распределение выявленных анеуплодий
Структура анеуплодий, выявленных в лаборатории «Геномед»
(всего исследовано 303 образца, анеуплодии обнаружены в 95 случаях).
Если обнаружены микроделеции/микродупликации
Микроделеции и микродупликации представляют собой, соответственно, потерю или удвоение хромосомного материала, которые невозможно определить с помощью обычного анализа кариотипа. Несмотря на их малые размеры, подобные перестройки могут приводить к возникновению тяжелых врожденных пороков развития.
При обнаружении микроделеций/микродупликаций в продуктах оплодотворения необходимо направить пациентку на консультацию к врачу-генетику, который оценит клиническое значение перестроек.
Хотя вероятность повторного возникновения аналогичной микроперестройки у плода при следующей беременности крайне мала, подобные случаи описаны, что служит основанием для рекомендаций по проведению инвазивной пренатальной диагностики и молекулярного кариотипирования.
Пациент М., женщина 34 года.
МВПР и внутриутробная задержка развития плода. Прерывание беременности на 22 неделе. В результате хромосомного микроматричного анализа была обнаружена микроделеция участка длинного плеча 2 хромосомы и микродупликация участка короткого плеча 17 хромосомы. Молекулярный кариотип: ап2д37.3(240,385,38 1-242, 783,384)х1,17р13.Зр13.1(525-8,350,996)х3
Сочетание микроделеции и микродупликации является признаком несбалансированной транслокации, причиной которой может быть сбалансированная транслокация у одного из родителей.
Результатом сбалансированной транслокации у одного из родителей могут быть повторные неразвивающиеся беременности или рождение тяжелобольного ребенка с хромосомной патологией.
Если обнаружена триплоидия
Молекулярное кариотипирование «Оптима» позволяет дифференцировать доброкачественную дигиническую триплоидию, когда дополнительный набор хромосом имеет материнское происхождение от диандрического частичного пузырного заноса, при котором дополнительный набор хромосом имеет отцовское происхождение.
При выявлении триплоидии необходимо рекомендовать молекулярное кариотипирование родителей для установления происхождения дополнительного набора хромосом
Пациент С., женщина, 31 год. Хромосомный микроматричный анализ. Определяется дополнительный сигнал от полиморфных маркеров на каждой хромосоме. Молекулярное кариотипирование родителей подтвердило отцовское происхождение триплоидии.
Третичные ворсины хориона циркулярно окружены промежуточным трофобластом с признаками пролиферации. Окраска гематоксилином и зозином, х200.
Умеренная гидратация стромы ворсины. Окраска гематоксилином и зозином, х200.
Если обнаружена однородительская дисомия
Полные однородительские дисомии имеют отцовское происхождение и являются характерным признаком пузырного заноса. Проведение молекулярного кариотипирования всегда может определить это и помочь в диагностике, особенно при неоднозначных гистологических данных.
ОБНАРУЖЕНИЕ
ХРОМОСОМНЫХ ПРИЧИН ПУЗЫРНОГО ЗАНОСА
Пузырный занос несет в себе огромный риск для матери. Пузырный занос с полной отцовской однородительской дисомией (ОРД) несет в себе 20%-ный риск возникновения гестационной трофобластической болезни (ГТБ), а при частичном пузырном заносе с триплоидией по отцовской линии шанс возникновения ГТБ равен 5%.
По этой причине всем женщинам с пузырным заносом следует контролировать уровень ХГЧ в крови и наблюдаться у врача после беременности.
Выявленная ГТБ лечится с помощью химиотерапии.
Установление родительского происхождения триплоидии позволяет выдать рекомендации по контролю ГТБ.
Полногеномная однородительская дисомия отцовского происхождения (полный пузырный занос)
При отсутствии возможности определения отцовского происхождения триплоидии в 61 % случаев будут предприниматься ненужные меры предосторожности для контроля риска ГТБ.
Триплоидия материнского происхождения не связана с пузырным заносом.
Определение контаминации материнскими клетками
Плодный материал всегда содержит примесь материнской крови или тканей (контаминация). Часто такие материнские клетки растут в культуре лучше, чем клетки плода, что может являться причиной ложных результатов.
В результате исследования продуктов оплодотворения в 51% случаев кариотип 46,ХХ был получен при анализе хромосом клеток материнского происхождения.
Способность молекулярного кариотипирования «Оптима» определить, относится ли результат к плоду или к матери, существенно снижает риск получения ложных результатов.
Часто задаваемые вопросы
- Анеуплоидию любой хромосомы.
- Триплоидию
- Тетраплоидию, при которой один набор хромосом — от одного родителя, другие три — от второго родителя (3:1). Тетраплоидия, при которой плоду передалось по два хромосомных набора от каждого родителя, не определяется (2:2).
- Однородительскую дисомию (включая случаи дисомии по одной паре хромосом и полногеномные однородительские дисомии полностью отцовского происхождения)
- Полную или частичную контаминацию материнскими клетками (для анализа может потребоваться образец крови матери)
- Делеции и дупликации размером более 1 Мб
- Все делеции и дупликации анализируются врачом-генетиком с использованием реферируемых и постоянно пополняемых баз данных.
Перечень делеций и дупликаций, которые всегда отражаются в отчете:
- Делеция 1p36
- Делеция 1q21.1
- Делеция 2q37
- Терминальна яделеция 3q29
- Делеция 4p16.3 (синдром Вольфа-Хиршхорна)
- Делеция 5p15.2 (синдром кошачьего крика)
- Делеция 7q11.23 (синдром Вильямса)
- Делеция 8q23.2-8q24.1 (синдром Лангера-Гидиона)
- Делеция 9q34
- Делеция 11p13-14 (WAGR)
- Делеция 11q24.1 (синдром Якобсен)
- Делеция 10p13-p14
- Делеция 15q11-q13 (синдром Прадера-Вилли, Ангельмана)
- Делеция 16p11.2 (эпилепсия)
- Делеция 17p11.2 (Синдром Смит-Магенис)
- Делеция .3 (Синдром Миллера-Дикера)
- Делеция 17q21.31
- Делеция 22q13 (синдром Фелан-МакДермид)
- Делеция 22q11.2 (синдром ДиДжорджи/вело-кардио-фациальный синдром)
- Дупликация 22q11.2
- Делеция Xq28 (MECP2 делеция)
- Дупликация Xq28 (MECP2 дупликация)
Несмотря на то, что с помощью теста «Оптима» можно выявить множество хромосомных отклонений, его нельзя использовать для обнаружения сбалансированных хромосомных перестроек (инверсии, реципрокные транслокации). При этих перестройках сохраняется нормальное количество хромосомного материала, но нарушается его конфигурация. Изменения, как правило, не вызывают у носителя «перестройки» проблем со здоровьем, но могут стать причиной потери беременности или хромосомных нарушений у детей. Приблизительно каждый 500-й человек является носителем сбалансированной хромосомной перестройки.
Сортировка плодного материала с целью отделения тканей плода для тестирования должна быть произведена еще до отправки образца. Ткань эмбриона обычно составляет менее 1% от общего объема плодного материала. Даже при тщательной сортировке образцов продуктов оплодотворения нет гарантии нахождения в них тканей эмбриона. Некоторые исследования показали, что более половины всех нормальных результатов тестирования образцов материала после спонтанного аборта являются таковыми из-за контаминации материнскими клетками
Все виды хромосомного анализа продуктов продуктов оплодотворения отличаются друг от друга. Для старых тестов, таких как стандартное кариотипирование, необходимо выращивание в лаборатории клеточной культуры . Этот тест занимает до 5 недель и не всегда успешен. В 25-40% случаев выращивание клеточной культуры оказывается невозможным, что приводит к нулевым результатам тестирования. При стандартном кариотипировании не существует способа определить, относится ли нормальный результат к тканям матери или эмбриона, а также имела ли место контаминация материнскими клетками.
Только тестирование «Оптима», основанное на анализе однонуклеотидных полиморфизмов, вместе с улучшенным биоинформатическим алгоритмом способно давать высокоточные результаты чаще и быстрее, чем стандартное кариотипирование. Так как для проведения данного тестирования не нужно выращивать клеточную культуру, вероятность отсутствия результата составляет менее 1%. Результаты тестирования предоставляются уже в течение 7 рабочих дней.
Пузырный занос может представлять собой серьезный риск для жизни и здоровья матери. Выявление пузырного заноса — критически важный фактор для лечения пациентки. В европейской популяции встречается с частотой 1/1000.
Звоните нам по телефону федеральной горячей линии 8 (800) 333-45-38 или обращайтесь к нашим партнерам.