Опухоли молочной железы

Рак молочной железы является наиболее встречающимся видом злокачественной опухоли у женщин и второй по частоте причиной смерти, связанной с раком. Ранняя диагностика, своевременно и правильно проведенное лечение могут значительно повысить шансы на выздоровление. Традиционные техники иммуногистохимии позволяют работать с небольшими образцами ткани. В сочетании с применением антител, специфичных по отношению к антигенам опухолевых клеток, это делает ИГХ-метод эффективным средством в руках патоморфолога, занимающегося диагностикой и прогнозированием течения онкологических заболеваний.

Основные диагностические маркеры:

• Estrogen Receptor
• Progesterone Receptor
• HER-2/neu
• Ki-67
• p120 Catenin
• CadherinE
• «Золотой стандарт» диагностики опухолей молочной железы — гормональный профиль PR, ER, HER-2/neu, Ki-67 — это диагностика всех доступных рецепторов, которые отвечают за активность раковой ткани. Включает в себя исследование нескольких показателей.
• PR, ER — это специфические белки-рецепторы, которые реагируют на выработку эстрогенов и прогестерона. Большинство раковых образований молочной железы (около 80 процентов) активно реагируют на изменения фона гормонов. Определение реактивности этих рецепторов играет важнейшую роль при оценке возможностей терапии гормонами.
• HER-2/neu — это генная белковая структура, которая расположена в раковой ткани. Представляет собой рецептор, который реагирует на выработку специфических антител. Исследовать данный параметр целесообразно с точки зрения определения прогноза лечения рака. При высокой активности HER-2/neu опухоль плохо поддается лечению. Сначала требуется моноклональная терапия, направленная на подавление активности структуры.
• Ki-67 — это белковая структура, обладающая способностью активизироваться при активном росте опухоли. Исследование дает возможность оценить прогноз для жизни больного. Чем выше экспрессивные характеристики Ki-67, тем меньше опухолевая дифференцировка и тем меньше у больной шансов на выздоровление.

Опухоли предстательной железы

Рак предстательной железы — одно из наиболее распространенных онкологических заболеваний. Большинство случаев (50–70%) диагностируется на 3–4-й стадиях, в том числе 25% — с генерализацией опухолевого процесса. К сожалению, ранняя диагностика рака затруднена из-за частого отсутствия характерных симптомов. Наряду с клиническими, наиболее информативным является метод гистологического исследования биоптатов предстательной железы.

Основные диагностические маркеры:

• p63;
• PSAP (ProstaticAcidPhosphatase);
• PSA (Prostate Specific Antigen);
• P504s (= AMACR - Alpha methylacyl-CoA-racemase);
• Cytokeratin High Molecular Weight (34betaE12);
• ERG (ETS Related Gene);
• PSMA (Prostate Specific Membrane Antigen);
• Androgen Receptor;
• Bcl-X;
• Cytokeratin 5 & 6;
• Cytokeratin Pan;
• Keratin 8;
• Cytokeratin 8 & 18;
• Ki-67;
• p53;
• Synaptophysin;
• Basal Cell Cocktail - Cytokeratin HMW + p63.

Опухоли легкого

Рак легкого является одной из наиболее частых причин смерти. В результате данного заболевания на планете ежегодно умирает около 1 млн человек. Рак легкого у мужчин в 85–90% случаев связан с табакокурением. Прогноз при раке легкого остается неблагоприятным. При отсутствии лечения с момента установления диагноза в течение 2 лет погибает до 90% больных. При хирургическом лечении 5-летняя выживаемость составляет около 30%. Хирургическое лечение в сочетании с лучевой и медикаментозной терапией увеличивает 5-летнюю выживаемость на 40%. Наличие метастазов значительно ухудшает прогноз. Современная диагностика и лечение больных раком легкого не могут обходиться без морфологической верификации опухоли с уточнением гистологической структуры и степени анаплазии (дифференцировки) опухолевых клеток. Иммуногистохимический метод остается одним из наиболее информативных методов на данном этапе диагностики

Основные диагностические маркеры:

• Thyroid Transcription Factor-1;
• Cytokeratin 7;
• НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНЫЙ РАК ЛЕГКОГО
  • ALK (DE5F3);
• ПЛОСКОКЛЕТОЧНЫЙ РАК ЛЕГКОГО
  • Cytokeratin 14;
  • Cytokeratin 5/6;
  • CEA;
  • EGFR;
• МЕЛКОКЛЕТОЧНАЯ КАРЦИНОМА ЛЕГКОГО
  • ChromograninA;
  • Synaptophysin;
• АДЕНОКАРЦИНОМА ЛЕГКОГО
  • EMA;
  • CytokeratinPan.

Меланома

Мелано́ма (лат. melanoma, melanoma malignum от др.-греч. μέλας — «черный») (уст. Меланобластома) — злокачественная опухоль, развивающаяся из меланоцитов — пигментных клеток, продуцирующих меланины. Одна из трех разновидностей рака кожи и самая опасная из них. Преимущественно локализуется на коже, реже — в сетчатке глаза, слизистых оболочках (полости рта, влагалище, прямой кишке). Часто рецидивирует и метастазирует лимфогенным и гематогенным путем почти во все органы. Верификация меланомы кожи и ее метастазов остается одной из наиболее сложных задач для онкоморфолога. Среди беспигментных меланом встречаются узловые, поверхностно распространяющиеся типа лентиго, светлоклеточные, веретеноклеточные, плеоморфные, мелкоклеточные, миксоидые, «невоидные», перстевидноклеточные и другие формы.

Основные диагностические маркеры:

• MelanomaAssociatedAntigen (MAA);
• CD63;
• Melanoma Marker (HMB45);
• MART-1/Melan-A;
• Melanoma (gp100);
• Tyrosinase;
• Microphthalmia Transcription Factor (MiTF);
• Nerve Growth Factor Receptor (NGFR);
• S100;
• Melanoma Pan (HMB45 + A103 + T311);
• MART-1 + Tyrosinase;
• Vimentin.

Стандартная панель содержит около пяти иммуногистохимических маркеров:

• р53 — степень активности митоза меланомы;
• Ki-67 — оценка интенсивности пролиферации, определяет прогноз болезни;
• bcl-2 — белок, который препятствует естественному апоптозу меланомы кожи, оценивается вероятность метастазирования;
• HMB-45 — оценка функции меланоцитов;
• S-100 — типичный антиген, встречающийся только при меланоме, позволяющий отличить ее от других опухолей или доброкачественных образований.

Лимфопролиферативные заболевания

Лимфома — злокачественное опухолевое заболевание лимфатической системы. Среди его видов выделяют лимфогранулематоз (лимфому Ходжкина) и неходжкинские лимфомы (НХЛ). По тому, из каких именно видов лимфоидных клеток возникает опухоль, выделяют В-, Т- и (редко) NK-клеточные формы. Большинство лимфом — В-клеточные. Диагностика лимфопролиферативных заболеваний в настоящее время занимает передовые позиции в современной патологии и требует одну из самых обширных панелей маркеров. Суммарная заболеваемость всеми видами неходжкинских лимфом в европейских странах составляет 12-15 случаев на 100 тысяч населения в год. Риск их возникновения увеличивается с возрастом. Инфицирование вирусом Эпштейна-Барра связано с повышенным риском заболевания, включая лимфому Беркитта. У детей неходжкинские лимфомы сравнительно редки: к детскому и подростковому возрасту относится не более 5% всех случаев НХЛ. Однако все же лимфомы занимают в структуре злокачественных заболеваний детского возраста третье место по частоте — после лейкозов и опухолей центральной нервной системы.

Основные диагностические маркеры:

• CD2
• CD3
• CD4
• CD5
• CD7
• CD8
• CD10
• CD15
• CD16
• CD20
• CD21
• CD23
• CD30
• CD34
• CD38
• CD45RO C
• D45 (LCA)
• CD56
• CD57
• CD68
• CD79a
• CD99
• CD138
• ALK
• Bcl-2
• Bcl-6
• Cyclin D1
• EMA
• Granzyme B
• Fascin
• Ki-67
• MUM1
• Pax-5
• Perforin
• PCNA
• TdT

Стромальные опухоли желудочно-кишечного тракта (СОЖКТ)

СОЖКТ возникают преимущественно в желудке (60%) и тонком кишечнике (25%), но также наблюдаются в прямой кишке (5%), пищеводе (5%) и ряде других мест (5%), в том числе в аппендиксе, желчном пузыре, мезентерии и сальнике. Возраст пациентов колеблется от подросткового до старческого, но пик заболевания приходится на 60 лет. По результатам большинства исследований наблюдается незначительная предрасположенность у мужчин. В 1998 году было показано, что СОЖКТ экспрессирует тирозинкиназный рецептор KIT (CD117). Причиной возникновения этих опухолей оказались интерстициальные клетки Кахаля (ICC). Подобно СОЖКТ, клетки Кахаля экспрессируют KIT и большинство положительно на CD34. Последующие исследования с большим числом разных лабораторий подтвердили, что KIT – это единственный наиболее специфичный маркер СОЖКТ. Иммуноопределяемый KIT присутствует на клеточной поверхности и/или в цитоплазме опухолевых клеток СОЖКТ приблизительно в 90% случаев. В подавляющем большинстве опухолей экспрессия KIT бывает сильной и однородной, но иногда демонстрируется только фокальная положительная реактивность и KIT отсутствует в небольшой подгруппе (~5%) опухолей, которые по другим морфологическим и иммунофенотипическим признакам соответствуют СОЖКТ. Среди KIT-положительных СОЖТК экспрессия CD34 определяется в 60-70% случаев, тогда как 30-40% имеют положительную реакцию на гладкомышечный актин (SMA), а 5% — на белок S-100. Ни один из этих антигенов не является специфичным для СОЖКТ. Экспрессия десмина в истинных KIT-положительных СОЖКТ является крайне редкой (1-2% случаев) и обычно фокальной. Данная форма онкологических заболеваний тяжело поддается морфологической диагностике. Используя современные панели маркеров, возможно четко и обоснованно диагностировать разные формы описываемой патологии. Иммуногистохимическое исследование является обязательным.

Основные диагностические маркеры:

• CD117 c-kit;
• CD34;
• Desmin;
• Beta-Catenin;
• S100;
• GFAP;
• CD99;
• ActinSmoothMuscle.

Колоректальный рак

Является часто диагностируемым раком среди мужского и женского населения. За последние несколько десятилетий смертность от колоректального рака снизилась в обеих группах, что отражает улучшение ранней диагностики и лечения. Ранние стадии рака ободочной и прямой кишки обычно не имеют симптомов, поэтому чтобы выявить заболевание на этой ранней стадии часто необходим скрининг. Прогрессирование болезни может вызвать кровотечение из прямой кишки, появление крови в кале, изменение в опорожнении кишечника, схваткообразные боли в нижней части живота. Применение ИГХ при раках толстого кишечника рассматривается на нескольких уровнях: для характеристики опухолей (эндокринный или эпителиальный тип), наследственной предрасположенности и для целей прогноза. Преобладающее использование ИГХ — это определение возможных или предполагаемых метастазов. Типичной локализацией для метастазов толстой кишки являются печень и легкие, оба органа, которые могут производить морфологию рака, идентичную метастазам из толстой кишки. ИГХ (класс I правил регулирования FDA) используется после первичной диагностики опухоли путем гистопатологического исследования и не включается для клиницистов как независимое исследование.

Основные диагностические маркеры:

• Beta-Catenin;
• BRAF;
• CDX-2;
• COX-2;
• Cytokeratin 7;
• Cytokeratin 19;
• Cytokeratin 20;
• MLH1;
• MLH2;
• MLH6;
• MSLN;
• MUC1;
• MUC2.

Метастатическая карцинома

Наиболее часто применение иммуногистохимии в изучении опухолей печени – это определение источника метастаза, когда первичная локализация опухоли не известна. Развитие и применение панели для иммунных окрашиваний может помочь решить почти все диагностические проблемы. 2-6 Цитокератины CK 7 и CK 20 — первая ступень в идентификации многих опухолей и с дополнительными иммунными реакциями, относительно специфичными для опухолей женского и мужского полового тракта, нередко дает возможность идентифицировать первичную локализацию метастатической опухоли.

Основные диагностические маркеры:

• Цитокератины различного молекулярного веса (CK 18, CK 19, CK 7, и CK 20 и др.).

Также в диагностическую панель рекомендуется включать ИГХ-тесты, направленные на экспрессию НER2/neu и Ki-67.

• НER2/neu — представляет собой мембранный белок, который кодируется геном ERBB2. Повышение его экспрессии имеет важное значение в патогенезе и прогрессировании определенных злокачественных процессов. Тестирование данного рецептора является важным биологическим маркером рака желудка, молочной железы, матки и ее придатков.;
• Ki-67 — ядерный антиген, состоящий из двух полипептидных цепей и являющийся основной частью нуклеарного матрикса. Его экспрессия позволяет выделить пролиферирующие клетки опухолевидного образования, которые находятся в активной фазе жизненного цикла. Данный маркер позволяет определить фенотип и скорость роста опухоли, риск ее метастазирования, потенциальную ответную реакцию на лечебные мероприятия и исход патологического процесса.

Опухоли желудка

Иммуногистохимические исследования чаще всего не требуются для оценки доброкачественных и злокачественных эпителиальных опухолей желудка, так как гистопатология, как правило, обеспечивает диагностику, но ИГХ нужна при изучении метастатического рака желудка, когда не ясен источник происхождения опухоли или когда макроскопические/ рентгенологическое проявления опухоли сбивают с толку (например, рак желудка напрямую и широко прорастает в печень и гистологически неотличим от холангиокарциномы). К тому же ИГХ может быть полезна для идентификации некоторых вариантов желудочных карцином, включая гепатоидную аденокарциному, в которой печеночная дифференцировка может быть подтверждена позитивной реакцией на альфа-фетопротеин AFP. Аденокарциномы желудка будут реагировать со многими антителами против кератинов, включая CK 18, CK 19, CK 7 и CK 20. Когда CK 7 и CK 20 используются вместе, многие аденокарциномы желудка будут окрашиваться как CK 7, так и CK 20. Примерно 25% случаев будет иметь фенотип CK 7 +/ CK 20-, или CK 7-/ CK 20+), и небольшое число случаев станет отрицательным для обоих маркеров. Первоначально считалось, что CDX-2 — специфический маркер для рака толстой кишки, будет реактивным в более чем 50% случаев и может быть свидетельством меньшей степени инвазивности. Аденокарцинома желудка как кишечного типа, так и типа перстневидноклеточной карциномы, могут иметь нейроэндокринную дифференцировку, что может быть не очевидно по гистологической картине, но проявляться по окрашиванию хромогранином и/ или синаптофизином.

Определение экспрессии рецептора EGFR при опухолях эпителиальной природы

Иммуногистохимическое определение экспрессии рецептора EGFR при колоректальном раке и опухолях легкого, а также при опухолях шеи и головы проводят для адекватного выбора схем химиотерапевтического лечения.

EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) является одним из трансмембранных рецепторов, экспрессируется на поверхности эпителиальных клеток и принимает участие в регуляции роста клеток и дифференцировки. Деление клеток в его присутствии происходит намного быстрее. При активации рецептора EGFR после связывания с факторами роста (EGF и TGF-a) запускаются механизмы, которые приводят к росту опухоли. Пролиферация раковых клеток повышается, а также стимулируется процесс метастазирования. Экспрессия EGFR — это показатель, свидетельствующий о том, что рост опухоли стимулируется деятельностью рецептора эпидермального фактора роста. Так как активация рецептора происходит за счет веществ самого новообразования, то правильнее будет говорить о экспрессии EGFR опухолью. Экспрессия EGFR обнаружена при следующих формах рака: легких, шеи и головы, толстой и прямой кишки. Иммуногистохимическое определение экспрессии EGFR позволяет установить статус этих рецепторов и назначить лечение. Экспрессия EGFR напрямую связана со степенью злокачественности и стадией развития опухоли. Специалист, в соответствии с полученными данными иммуногистохимического исследования, классифицирует опухоль как EGFR-отрицательную или EGFR-положительную.

Гиперэкспрессия EGFR говорит о высокой злокачественности, поздних сроках развития опухоли и метастатических процессах. Этот фактор является неблагоприятным в отношении прогноза болезни и свидетельствует о высокой пролиферативной активности опухоли, агрессивности, устойчивости к проводимой терапии.

Низкая степень экспрессии EGFR свидетельствует о регрессе опухоли и положительной динамике в лечении.

Иммуногистохимическое исследование рецепторной чувствительности к эстрогенам и прогестерону в эндометрии

ИГХ-исследование рецепторной чувствительности к эстрогенам и прогестерону в эндометрии проводится для выявления причин отсутствия фертильности, а также для оценки злокачественности процессов в тканях матки. Исследование сложное, проводится планово, необходима соответствующая квалификация патологоанатома.

Рецепторы к эстрогенам (ER) и прогестерону (PR) — это чувствительные маркеры, которые реагируют на колебания некоторых гормонов, влияющих на рост опухолей и развитие гиперпластических процессов в эндометрии. Расположены в тканях эпителия матки и в клетках молочной железы. Их определение дает возможность оценить влияние гормональных факторов на прогрессию злокачественного роста, а кроме того, выявить наличие других очагов активности, помимо маточного. Определение маркеров входит в программу обязательного скрининга у больных женщин с подозрением на инфильтративную активность рака.

Иммуногистохимическое исследование проводят при:

• бесплодии;
• опухолях эндометрия;
• дисфункции менструального цикла;
• гиперпластических процессах в эндометрии.

При бесплодии методика позволит выяснить, может ли плодное яйцо прикрепиться к стенке матки. Для рака метод не является способом ранней диагностики. Оценка рецепторной активности позволяет выявить наличие метастазирования и оценить лечение в полости матки. При нарушениях овуляции методика определяет эффективность гормональной терапии. При изменениях в полости матки гиперпластического характера усиление активности рецепторов к эстрогенам и прогестерону свидетельствует о развитии низкодифференцированных опухолей, потенциально опасных для жизни женщины.

Общий принцип результата — чем больше экспрессия рецепторной активности, тем выше вероятность прогрессирования опухоли. Чем ниже активность, тем меньше возможность естественного оплодотворения.

Хронический эндометрит

Хроническим эндометритом называют воспаление мукозного слоя матки, которое провоцируют различные вирусы или патогенные микроорганизмы. В патологическом очаге происходят морфологические и функциональные изменения эндометрия. Хронический эндометрит — клинико-морфологический синдром, при котором в результате повреждения эндометрия инфекционным агентом возникают множественные вторичные морфофункциональные изменения, нарушающие циклическую биотрансформацию слизистой оболочки матки, что приводит к стойкому нарушению менструальной и генеративной функций. Частота встречаемости хронического эндометрита в популяции составляет 2,6–51%. Причем среди этих женщин бесплодны 60,4%, а неудачные попытки ЭКО и переноса эмбрионов отмечены у 37%. В 2006 г. Международная федерация гинекологии и акушерства уравняла понятия «неразвивающаяся беременность» и «хронический эндометрит».

Причины хронического эндометрита:

• инфекции органов малого таза, влагалища и цервикального канала;
• внутриматочная спираль;
• ранние интимные контакты;
• радиотерапия тазовых органов;
• хирургическое вмешательство в полости матки;
• злоупотреблением алкоголем и курение.

Практикующие специалисты относят воспалительные процессы, происходящие в органах малого таза, к аутоиммунной патологии. Для определения характера нарушений и выявления пациенток с патологическим ответом иммунной системы, который провоцирует воспаление эндометрия, назначается иммуногистохимическое исследование, которое проводят с использованием стандартной панели моноклональных антител:CD16, CD20, CD138, CD56, HLA-DR.

ИГХ-исследование рецептивности эндометрия (определение окна имплантации)

Рецептивность эндометрия — комплекс структурно-функциональных характеристик эндометрия, определяющий способность его к имплантации. С начала 90-х годов прошлого столетия понятие «рецептивность эндометрия» начинает обретать свое современное значение как процесс сложной интеграции и многоуровневого «диалога» между эндометрием и эмбрионом в специфический период «окна имплантации». Продолжительность «окна имплантации» составляет, в среднем, 4 дня: с 6 по 8-10-й дни после пика секреции ЛГ, или с 20 по 24 дни менструального цикла (при 28-дневном цикле). В настоящее время различают три уровня рецептивности: генетический, протеомный и гистологический. При открытии «окна имплантации» в эндометрии усиливается экспрессия 395 генов (АроЕ, PLA2) и снижается экспрессия 186 генов (ITF, различные протеазы, внеклеточные матриксные белки и др.). Среди протеомных маркёров, связанных с рецептивностью эндометрия, выделяют различные молекулы адгезии, факторы роста, цитокины и рецепторы: семейство IL-1, LIF и LIF-R, αVβ3, TNF-α, IFN-γ и др. Из них наиболее изученным является лейкемия-ингибирующий фактор (LIF) — член семейства IL-6. Максимальная его экспрессия в эндометрии наблюдается на 20-й день цикла. Третий уровень рецептивности — гистологический. «Окну имплантации» в эндометрии соответствует средняя стадия фазы секреции менструального цикла. Эндометрий может обладать рецептивными свойствами только в том случае, если молекулярные маркёры рецептивности выявляются точно в среднюю стадию фазы секреции менструального цикла. Одним из ключевых ультраструктурных образований, участвующих в формировании рецептивности, являются пиноподии. Это микроскопические выпячивания в апикальной части поверхностного эпителия эндометрия, образующиеся на месте микроворсинок в «окно имплантации» и выступающие в полость матки. Предполагают, что основные рецепторы для прикрепления бластоциты располагаются на поверхности пиноподий, где также концентрированно экспрессируется LIF. Любой дисбаланс в экспрессии стероидных рецепторов может привести к нарушению морфофункциональных свойств эндометрия, его рецептивности. Поэтому определение уровня ER и PR в среднюю стадию фазы секреции позволяет дополнить морфологическое исследование эндометрия, оценить его рецептивность. В норме показатель соотношения PR/ER в строме колеблется от 2 до 4.В среднюю стадию фазы секреции наблюдается физиологическое снижение уровня ERα в эндометрии. Это критическое событие, освобождающее от подавляющего влияния определенные гены и обеспечивающее сигнал для начала внутриматочной рецептивности.

Гиперэкспрессия ER α в среднюю стадию фазы секреции вызывает нарушение экспрессии биологических маркёров имплантации, нарушает рецептивность эндометрия.

Программа комплесного исследования состоит из следующей панели антител: ER, PgR, CD56, CD138, LIF, а также подсчета количества пиноподий.